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干細胞治療范文第1篇

黨的十確定“全面建成小康社會”目標，醫療衛生改革也步入“深水區”與“攻堅區”，“看病難、看病貴”是全面建成小康社會進程中一個需要逾越的障礙。這其中的原因，我們或許可以從新近頒布的兩個關于干細胞臨床研究管理法規中窺見一二。

新一輪醫院“設備競賽”？

2015年8月，國家衛計委與國家食藥監總局聯合下發了被擱置近5年之久的干細胞臨床研究的管理文件《干細胞臨床研究管理辦法（試行）》和《干細胞制劑質量控制及臨床研究指導原則（試行）》。

相關規定讓人產生疑惑，“中國有多少家三甲醫院就要建多少個GMP的細胞制備中心”嗎？在公立醫院大型裝備“軍備競賽”還未結束的情況下，醫院是否又要開始新一輪的“GMP細胞制備中心”的“軍備競賽”呢？

從許多醫療機構的自我宣傳中可以看出，由于目前公立醫院不明確的職能定位與評價指標，各大醫院不約而同地進入了一種無序的大型先進醫療設備與實驗室儀器設備配置的“競賽”當中。暫且不論這些大型先進設備是否能對臨床治療過程中患者的治療收益最大化、對疾病的診療結果是否最佳，單單是購置這些設備和裝備就需要高昂的成本，并且還需要具備資質的技術人員對這些設備進行操作和維護。

從目前公布的關于“細胞治療（包括干細胞和腫瘤免疫細胞治療）”管理規定中，隱約能看到這種“設備競賽”的影子。比如要求每個擬從事細胞治療的醫療機構要配備相應的符合GMP標準的細胞制備實驗室，臨床級細胞制備中心的設置有硬件軟件要求以及人力資源配置等要求。照此規定，醫院不花上數百萬甚至上千萬的先期硬件投入，就想要從事干細胞療法或腫瘤的細胞治療，簡直是癡人說夢。

細胞治療是一項代表著前沿科技的生物醫學技術，當然每家醫院都希望開展，然而可想而知的就是走到了目前醫院發展的那條“不歸路”――現時的醫療設備競賽尚未結束，新一輪的細胞制備實驗室的配置競賽又即將開始了。如些循環往復，醫療成本何以下降？看病貴難題又何以解決？

故而筆者認為，要解決這個問題，首先需要更高層面的整體規劃，也就是站高一層，俯瞰區域的整體醫療資源配置，加強使用效率，形成規模效應。其次就是專業的工作交由專業的人來做，形成細胞治療價值鏈不同節點所要求的比較優勢，推動科技成果向有效的臨床手段轉化，將個體化細胞治療技術轉化為了臨床醫生隨時可用的高效工具與手段。

三大策略完善產業鏈

整體規劃、差異配置是解決問題的首要一步。在進行整體規劃后可以發現，一個區域或一個城市其實不需要每家醫院都設置“大型裝備”的細胞制備室及“種子細胞庫”，可能一個城市只需要一個“大型裝備”符合GMP標準的細胞制備中心和一個“種子細胞庫”就可以覆蓋整個城市的臨床治療需求。整體規劃將過去的分散投資轉為集中投資，這樣建起的細胞制備室和“種子細胞庫”才可能在硬件、軟件流程、質控管理以及人力資源配置等方面真正達到國際標準的臨床級應用要求。

區域的整體規劃會帶來相應的規模效應，能在很大程度上減少大型設備閑置的情況。而且規模效應還會帶來經驗曲線的提升與運營成本的下降，高新技術的“普惠民眾化”也能隨著產業化發展而早日實現，令更多患者受益。

整體規劃之外，個體化細胞治療產業的發展同樣離不開專業分工和協同互補。與現有醫療機構均是按完成臨床疾病的診斷治療這樣一個目標投資建設不同，個體化細胞治療的產業發展需要新的基礎設施作為產業形成的支撐。

從產業發展方式來看，細胞治療作為一個產業鏈條中的前端，細胞組織“原材料”的采集和臨床級細胞制備所需要的硬件要求（潔凈、通風、操作流程方向性等等復雜要求）、軟件流程（關鍵指控點）及從業人員專業資質，都與臨床醫療機構的要求完全不同。故而，這樣的鏈條上需要有新的具有核心技術、創新能力與相關資質的專業機構參與進來，完善優化細胞治療產業鏈的形成。

針對各類專業機構，設置準入認證、進行集約管理也是不容忽視的一個環節。個體化細胞治療是一個關乎人民群眾生命健康的產業，更是一個需要設置技術準入與投資壁壘的高監管行業。

從監管及責任厘清的角度來看，專業的事情交由專業的機構來做亦是非常必要的。而專業分工的核心即在于行業準入和定期審查，也有利于監管機構可以有目標地、定點地、專項地進行監督管理了。

目前，中國的醫療衛生改革仍在進行當中，國家的專項資金也在持續注入，但仍有一些與預期相悖的情形不時發生。那么，新的個體化細胞治療“創新鏈+產業鏈”到底該如何設置才能避免偏失呢？

干細胞治療范文第2篇

關鍵詞 干細胞治療 安全性 有效性 合法

干細胞是一類具有不同分化潛能，并在非分化狀態下自我更新的細胞。用于治療的干細胞主要包括成體干細胞、胚胎干細胞以及誘導的多能性干細胞。技術人員可以應用人自體或異體來源的干細胞經體外分離、純化、培養、擴增、修飾、誘導分化、凍存及凍存后的復蘇等過程后回輸（或植入）人體，用于疾病預防和治療。干細胞預防和治療疾病的預期有望優于現有的手段，尤其對于尚無有效干預措施的疾病，以及威脅生命和嚴重影響生存質量的重大疾病。正是由于這個重大發現，在全世界掀起了一股干細胞研究熱潮，并迅速同時形成了新興的干細胞產業經濟。但是有一些干細胞企業為追求暴利而漠視科學發展的客觀規律以及社會倫理與法律問題。干細胞這項新技術是一柄雙刃劍，需要法律對其進行規制，才能切實保護患者的合法權益，真正造福人類。

1干細胞治療進展

干細胞能夠分化為不同類型的細胞，成為了人類的一種“修復元件”。可以通過注射干細胞制劑治療疾病，比方說修復受損的神經系統，恢復神經系統的功能，治愈因神經細胞受損導致的癱瘓。干細胞也可分化成新的胰腺細胞分泌胰島素治療糖尿病。從理論上講，干細胞有望治愈用傳統方法無法治愈的疾病，如糖尿病、老年癡呆癥、心臟衰竭、紅斑狼瘡、黃斑變性、類風濕、惡性腫瘤等疾病。因此干細胞似乎成了萬能細胞，受到醫療界高度重視。2009年1月23日，美國Geron公司胚胎干細胞用于脊髓損傷被FDA批準用于臨床試驗。（這是美國首次對胚胎干細胞臨床研究發放通行證）。2010年3月，美國Advanced Cell Technology公司宣布用于治療少年型黃斑變性的胚胎干細胞療法“MA09-hRPE”被FDA批準臨床試驗，獲得了FDA授予孤兒藥地位（FDA批準的第二項干細胞療法）。2011年1月3日，美國Advanced Cell Technology公司宣布用于治療老年黃斑變性的胚胎干細胞療法被FDA批準臨床試驗。2010年6月，Osiris Therapeutics公司的Prochymal 在三種疾病（克羅恩病、預防骨關節炎、心肌損傷）治療中完成三期臨床試驗。2010年11月，美國國立衛生院批復有11種干細胞進入FDA審批程序，并稱近期還有30種干細胞陸續進入FDA審批。中國在這方面比較落后，目前還從沒有批準過胚胎干細胞制劑治療技術的臨床試驗。

干細胞治療技術的美好愿景刺激了干細胞產業的發展。我國雖然尚未批準胚胎干細胞技術的臨床試驗，但是從事干細胞技術研究開發的科研機構或者企業也為數不少，遍布全國各地。有北京經開區的漢氏聯合干細胞研究院、上海浦東新區的上海科醫聯創生物科技有限公司、上海市長寧區的臻景醫療公司、廣州市生物島的軍事醫學科學院華南干細胞與再生醫學研究中心、深圳市高新科技產業園的深圳市北科生物科技有限公司、中國濱海新區華夏干細胞聯盟、濱海新區科技園的昂賽細胞基因工程公司、無錫的奧斯達干細胞有限公司、湖南長沙市麓谷高新區人類干細胞國家工程研究中心等。并且也有上市公司，如滬深兩市中唯一家以干細胞產業為主營業務的上市公司中源協和干細胞生物工程股份公司（股票代碼：600645）等。這些企業形成了一個新興的干細胞行業。

2干細胞治療的安全性、有效性

干細胞制劑無論是作為藥品還是醫療技術在應用于人體臨床治療之前，都必須證明它的安全性、有效性。而這個驗證過程漫長而復雜，首先是動物實驗、其次是第三方檢測、然后再是臨床試驗。只有證明安全性與有效性后才能應用于臨床治療。

英國《每日郵報》報道了一個典型案例，前奧運選手馬克斯?特魯克斯患帕金森癥而接受了干細胞療法。醫生從胎兒那里提取干細胞，通過體外培養，擴增、純化等技術制成干細胞制劑注入患者大腦中。但是當這名病人去世后，病理學家們發現，這名病人的軟骨、皮膚和骨頭都堆積在大腦內。也就是說注入的干細胞并沒有按照醫生的意圖分化成神經細胞，而是分化成了軟骨、骨頭與皮膚。當然，隨著技術的發展，像上述案例中干細胞不定向分化的情況已經非常少了。但是很多學者還是總結出干細胞治療的隱患或者存疑的地方。

2.1免疫排異反應

我們身體的免疫系統天天在擊退微生物、病毒、有毒物質的入侵。我們的免疫系統發現這些異物（包括移植手術），便會發動一系列有害的攻擊行為。這就是我們常說的免疫排斥反應。如果干細胞來自于異體，那就有可能引起免疫排斥反應。當然科學家可以通過對干細胞加工的方法，使它能夠應對免疫系統，但這需要臨床驗證。

2.2非定向分化

上述英國《每日郵報》報道的前奧運選手馬克斯?特魯克斯案例，就是一個干細胞非定向分化的案例。當醫生期望注入的干細胞能夠分化成為健康的神經細胞，修復神經系統，但是它卻分化成了骨頭與皮膚。如何準確地誘導干細胞分化成為制定的細胞，這還需要進一步研究。

2.3細胞生長失控與致瘤性

正常的細胞生長是受控的，能夠精確自我復制、恰當時候停止再生、專門分工、各司其職、受損自我凋亡。但是異體注入的干細胞制劑卻不一定遵循這套嚴格的程序，不一定定向分化、不一定停止再生。當注入的細胞生長失控，就有可能生成腫瘤，比如iPS細胞致瘤性高達20%。

2.4作用機理不太清楚

注入的干細胞制劑如何分化、如何分工、如何修復系統功能，以及異體干細胞存活多久，如何在體內發揮作用。對于這些問題還不是完全清楚。

從這些問題可以看出，干細胞治療目前存在安全性問題。

另外在治療腫瘤方面，根據國內所報道的案例，療效不明顯。2014年3月15日與3月16日在中央電視臺“焦點訪談” 連續兩天報道浙江無錫“非法干細胞治療事件”：

2011年，58歲的昆明市民張某被查出身患結腸癌晚期，一個偶然的機會，他們聽說，無錫某干細胞公司擁有一種非常有效的治療方法，說人體干細胞很有用，能治好。并且其董事長跟他們說：“一般的癌癥根本沒有問題。你這個病很有希望的，如果不來我們這里的就沒救了。”一個劑量12萬元，一個療程36萬元。張某的女兒湊足了36萬元，匯到該公司的賬戶上。第二天該公司把張某夫婦帶到了無錫市濱湖區的一家社區醫院為張某進行胚胎干細胞治療。2012年3月30日，公司人員告訴他們，治療結束，效果很好，可以回家休養。而當一家人回到昆明，張某的病情遠沒有像該公司所承諾的那樣，向好的方向發展，能再活十年，而是急轉直下，短短三個月便不幸去世。

干細胞治療技術還處于初級階段，還有許多難題有待克服。國家應該大力支持干細胞研究，以盡快解決技術難題，攻克科技難關。但是當技術還不成熟，在安全性、有效性沒有確證的時候，為了贏利而匆促應用于臨床，這就嚴重侵犯了患者的利益。

3干細胞治療的管理

2010年10月7日Nature雜志發文“Stem-cell laws in China fall short”，從立法層面指出中國規制干細胞技術的相關法律欠缺，現有法律缺乏可操作性。認為準確清晰、詳細的配套規則是必須的。

2012年4月11日Nature雜志繼續發文“China’s stem-cell rules go unheeded”從執法層面指出中國干細胞規制收效甚微。未按要求申報批準、未經臨床試驗驗證的干細胞治療方法廣泛應用于臨床治療，并且禁而不止。

目前中國干細胞市場被公認存在以下弊病：

3.1未經臨床試驗驗證、未按要求申報批準而擅自應用于臨床

2009年3月2日衛生部組織制定了《醫療技術臨床應用管理辦法》，并于5月1日施行。干細胞治療技術被列入第3類醫療技術，由衛生部負責技術審定和臨床應用管理。2013年，我國出臺了《干細胞臨床試驗研究管理辦法（試行）》，第四條規定：“干細胞臨床試驗研究必須在干細胞臨床研究基地進行，干細胞臨床試驗研究基地由衛生部與國家藥品食品監督管理局組織進行遴選和確定。”也就是說所有干細胞制劑只要應用于臨床治療，就必須經過臨床試驗驗證。可事實上中國許多醫院都在開展干細胞治療技術，卻未經臨床試驗。

3.2虛假宣傳擴大療效

如同2014年3月15日報道的無錫某干細胞公司聲稱她們的技術治療一般的惡性腫瘤根本沒有問題，最壞也能帶著癌癥生存10年。干細胞技術治療惡性腫瘤，如果未經臨床試驗驗證，意味著其安全性、有效性尚未確定。很多企業不顧這些基本事實，為追求高額利潤，任意擴大其療效以吸引患者。

3.3無收費依據與收費標準擅收高價

干細胞臨床試驗研究管理辦法（試行）第七條規定：開展干細胞臨床試驗研究，不得向受試者收取費用，不得市場化運作，不得干細胞治療廣告。這說明干細胞技術的臨床試驗不能收取費用。另外中國還沒有批準干細胞的臨床試驗，所以未經臨床試驗的干細胞技術沒有資格應用于臨床治療，更談不上收取費用了。即使干細胞治療技術獲得了臨床批文，準許應用于臨床，也不能擅自收取高價，而是必須作為三類醫療技術通過另外的程序申請物價批文。

3.4干細胞供體未經檢測

我國《人體細胞治療研究和制劑質量控制技術指導原則》強調無論細胞來源如何，都必須提供細胞的組織來源及細胞類別的確證資料，其中包括形態生化或表面標志等。

若體細胞來源于同種異體，需說明供體的年齡、性別，供體必須符合國家對獻血員的要求，并提供測試的方法及符合條件的依據。供體必須經過檢驗證明HBV抗原、抗HCV、抗HIV-1/2、梅毒抗體、細菌、霉菌均為陰性，必要時需說明供體的既往病史、家族史等臨床資料。對于那些需通過激活體內免疫功能發揮作用或需體細胞在體內長期存活的體細胞治療項目，除ABO血型外，還必須對供體做HLA-I類和II類分型檢查，并證明與受體（病人）相匹配，同時提供檢測方法和依據。若體細胞來源于動物，必須提供動物的來源，遺傳背景，健康證明（如重要病原體，包括人畜共患疾病的病原體），飼養條件，應用此類體細胞的必要性和安全性。

可是許多開展干細胞治療的醫院與企業為節約成本，利益最大化，忽略或簡化了對細胞與供體的檢測。

3.5干細胞來源的倫理問題

事實上目前許多醫院或者企業的干細胞來源是流產的嬰兒或者剩余胚胎。通過私下與婦產科達成某項協議而獲得胚胎干細胞。這種獲得方式即使作為科研也必須通過倫理審查。如果流產胎兒是成為企業營利的“原材料”，幾乎不可能會通過倫理審查。

干細胞治療范文第3篇

小細胞肺癌(sCLC)是一種高度惡性的腫瘤，早期出現區域淋巴結及遠處轉移。因此臨床上以化療為主要治療手段[1]。該病對化療敏感，單藥有效率高，臨床常用聯合方案。本病例采用自體造血干細胞移植(aSCT)治療取得很好療效，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 患者，女，58歲，與2006年8月21日入院，經過CT顯示右肺占位，做病理后確診為sCLC局限期。

1.2 aSCT動員、采集、保存及回輸

1.2.1 aSCT動員 采用大劑量化療加動員劑進行動員。方案：紫杉醇（135mg/m2）+卡鉑(AUC=5)+VP-16(75mg/m2)，第1天至第3天，四個周期（每個周期10天）獲得完全緩解后，給予動員劑重組粒細胞集落刺激因子rhG-CSF(Kirin公司產品)5～10μg/kg皮下注射，共5～10天[2]。

1.2.2 aSCT采集、保存及回輸 當外周血WBC>1.0×109～5.0×109/L，PLT>20×109～50×109/L，外周血CD34(+)細胞>1%時開始采集。使用CS-3000plus細胞分離機（美國Baxter公司生產）。分離夾用GRANULO，收集夾用A-35，全血流速55mL/min，全血∶抗凝劑為10∶1，終點量值10 000mL（根據需要確定），1 000mL生理鹽水，500mL抗凝劑（ACD-A），600mL轉輸袋，以及消耗品管路一套。按程序進行采集。采集的aSCT 200mL在4℃冰箱保存，待預處理72小時后經靜脈回輸。

1.3 預處理方案 基本方案為紫杉醇175mg/m2+卡鉑(AUC=7)+VP-16(600mg/m2)，第1天至第3天。

1.4 支持治療與并發癥的防治 患者于預處理方案進行前一天住進無菌層流凈化病房。根據患者進食情況適當給予腸外營養。強迫利尿，水化，5%碳酸氫鈉化尿液及Mesna預防出血性膀胱炎，常規口腔及肛周護理，在粒細胞缺乏期防感染而用廣譜抗生素[3]。

2 結果

移植后患者獲得了造血重現，MNC≥0.5×109/L及PLT≥20×109/L。沒有出現預處理后的不良反應，也未出現嚴重感染及出血性膀胱炎等嚴重并發癥。移植后的生存期已達300天。

3 討論

近幾年來aSCT正在越來越廣泛地應用于治療惡性腫瘤，而sCLC對化療高度敏感，許多學者多選擇局限期患者中誘導化療達CR或接近CR的患者，將aSCT作為后強化治療手段。這樣它可以使腫瘤患者耐受大劑量化療，最大限度殺傷腫瘤細胞，而且由于造血重建快，從而減少了出血感染的機會，降低了治療費用，體現了aSCT的優越性[4]。有研究表明，采集的aSCT在4℃可以安全保存4～5天，期間患者可接受大劑量化療。我們采集的aSCT也采取在4℃保存的方法，無需超低溫保存設備及技術，這不僅可簡化移植過程，降低醫療費用，也可減少aSCT在體外被污染的機會，該患者目前仍處于CR中。對于患者提高了其生存率，但aSCT治療sCLC長期療效還有待進一步觀察[5]。

參考文獻

[1] 張季平.臨床內科學[M].天津：天津科技出版社，1999：1888.

[2] 張繼良，何華.自體造血干細胞移植治療小細胞肺癌的護理[J].護理學雜志，2003，18（1）：21-22.

[3] 達萬明.自體造血干細胞移植治療惡性淋巴瘤的近況[J].中華血液學雜志，1996，17(10)：554-557.

干細胞治療范文第4篇

1966年Friedenstein等［2］首先從骨髓中發現MSCs，是來源于中胚層的成體干細胞，廣泛存在于全身結締組織和器官間質中。MSCs在體外長期培養的過程中始終保持多向分化潛能，而且易于分離、培養、擴增及外源基因的導入和表達，免疫原性弱，具有強大的遷移能力。其分泌的多種細胞因子具有調節免疫、支持造血的特性，對于修復組織缺陷或損傷有獨特的優勢，遺傳背景穩定，且不受胚胎干細胞研究中遇到的倫理問題限制。因此，MSCs在細胞治療、基因治療及組織工程中得到廣泛的應用。目前研究較多的是骨髓MSCs、外周血MSCs、臍帶MSCs、胎盤MSCs及羊水MSCs。骨髓間充質干細胞(bonemarrowmesenchymalstemcells，BMSCs)是存在于骨髓微環境中的一種成體干細胞，來源于發育早期的中胚層，是具有高度自我更新能力和多向分化潛能的多能干細胞。動物實驗及臨床研究證實，BMSCs可促進損傷組織結構及功能的修復，用于治療腦、脊髓、心肌、皮膚及頜面部等多種損傷性疾病，臨床已取得滿意療效［3－5］。但成人BMSCs存在病毒高度污染的可能和潛在的致瘤性，隨著年齡增長其細胞數量和擴增、分化能力呈明顯下降趨勢，且供者BMSCs采集須行骨髓穿刺術，因患者易感染、體質較弱等因素限制了自體BMSCs移植的應用。近年來，自體外周血干細胞(peripheralbloodstemcells，PBSC)移植已成為繼自體骨髓移植之后治療惡性血液病、免疫缺陷性疾病和某些實體腫瘤的又一有效輔助方法，在治療神經、心血管系統疾病等方面也取得滿意療效。PBSC具有更強的增殖能力、造血及免疫功能恢復快、來源及采集方便及痛苦小等優點。但外周血的祖細胞和多能造血干細胞只占骨髓細胞的1/104～1/105，需用血細胞分離器采集多次，同時需借助造血干細胞動員劑，使骨髓或其它部位的造血干細胞進入血流，以提高外周血造血干細胞的單次采集效果。

臍帶間充質干細胞(umbilicalcordmesenchymalstemcells，UCMSCs)的研究是傳統BMSCs的新生力量，UCMSCs多數生物學特征與BMSCs相似，但其增殖能力、CFU-F頻率、CD106、HLA-Ⅰ表達和神經誘導分化能力等優于BMSCs。同時臍帶來源廣泛，便于取材，對供者無不利影響，不影響臍帶造血干細胞的保存，無道德倫理限制［6］，且其干細胞輸注相關的病毒和病原微生物感染率遠低于BMSCs移植，是一類免疫缺陷細胞，不需經過嚴格配對，異體移植無免疫排斥反應或反應較弱，適于不同個體之間移植且易于轉染外源基因。目前已用于治療神經退行性疾病帕金森綜合癥、肺纖維化修復、類風濕、腎損傷、大腸炎、改善肝硬化后肝功能、抑制乳腺癌等領域以及作為基因治療載體細胞［7－10］。因此，作為一種新型種子細胞，UCMSCs的應用具有更廣闊的前景。另外，目前發現通過各種體外誘導方法，可使胎盤間充質干細胞(placentalmesenchymalstemcells，PMSCs)可以分化為成骨細胞、軟骨細胞、脂肪細胞、肌細胞、神經細胞等多種細胞［11］。PMSCs來源廣泛，供者無痛苦，污染機會少，分化能力較佳，增殖迅速，具有更強的長期增殖能力。Prusa等［12］首次證實，羊水細胞表達Oct-4轉錄因子，Oct-4被認為是鑒定多潛能干細胞的標志性基因。羊水來源干細胞同樣具有多向分化潛能，培養條件適當可以分化出內胚層、中胚層、以及外胚層3個胚層的細胞［13］。近年羊水干細胞在組織工程學領域的研究有了新的突破，包括成功地構建了組織工程骨［14］、人工心瓣膜的體外培育［15］及異體移植后聯合高壓氧療促進受損神經生長［16］等多個方面。羊水取材簡便，既可在產前診斷時經羊膜穿刺獲取，也可在分娩過程中收集。不會對母親和胎兒造成傷害，安全性高，且不涉及倫理問題。

MSCs治療卵巢早衰

近年來采用骨髓、臍帶和羊水來源MSCs移植治療化療藥物、免疫性卵巢炎、半乳糖和化學因子誘導的POF取得了明顯效果。MSCs原位、腹腔或靜脈注射后，可遷移、定植于卵巢，并在卵巢存活、生長，可恢復實驗動物卵巢形態、大小和正常動情周期，增加卵巢各級卵泡數，促進顆粒細胞生長，抗顆粒細胞凋亡，改善卵巢內分泌功能，恢復受孕。

1體外研究

體外研究分析干細胞治療作用的機理，目前主要研究干細胞與卵巢顆粒細胞共培養，檢測其是否可抑制卵巢顆粒細胞調亡。POF主要的病理學表現為顆粒細胞凋亡，而凋亡調控涉及多種基因和蛋白，包括Bcl-2基因(B-celllymphoma/leu-demia-2，淋巴細胞瘤/白血病基因-2)、Bcl-2相關X蛋白(Bax)、細胞型Flice抑制蛋白(cellular-Flicelikeinhibitoryprotein，cFLIP)、P53等［17－18］。Bcl-2可以通過線粒體途徑抑制卵巢顆粒細胞的凋亡，而Bax則可促進細胞的凋亡。cFLIP在健康卵泡中高表達而在閉鎖卵泡中低表達，推測其具有抑制卵巢顆粒細胞凋亡作用［18］。一些細胞因子如血管內皮生長因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)、胰島素樣生長因子-1(insulin-likegrowthfactor-1，IGF-1)、肝細胞生長因子(hepatocytegrowthfactor，HGF)等也參與了凋亡調控過程［19－20］。體外培養BMSCs發現，其分泌的多種細胞因子如VEGF、HGF、IGF-1、堿性成纖維細胞生長因子(basicfi-broblastgrowthfactor，b-FGF)等，可減少細胞凋亡，促進上皮增生及血管生成，抑制炎癥反應［21－22］。付霞霏等［23］研究報道，顆粒細胞與BMSCs共培養后，BMSCs能上調Bcl-2基因在顆粒細胞中的表達，并分泌具有抗凋亡作用和促血管生成的細胞因子，如VEGF，IGF-1和HGF，顆粒細胞凋亡率下降，細胞存活率上升，BMSCs細胞數越多，凋亡率越低，呈現數量依賴性。陳芳等［24］在體外實驗發現，UCMSCs具有抑制卵巢顆粒細胞凋亡的作用。

2動物實驗及體內研究

由于POF的病因尚不清楚，目前仍沒有非常理想的POF動物模型。因化療藥物造模具有動物取材容易、病理結果與人一致、可用藥物逆轉、操作容易且造模投入人力和時間相對較少等優點，是目前常見卵巢早衰造模模型。目前研究主要針對化療藥物造模方式導致的卵巢早衰，觀察移植干細胞的存活遷移情況，探討MSCs移植對卵巢損傷大鼠卵巢結構、功能的影響及其可能作用機制，為進一步的研究和臨床治療提供實驗依據。Lee等［25］報道，移植綠色熒光標記的BMSCs至環磷酰胺誘導的POF小鼠體內，發現小鼠卵巢內未成熟卵泡數量顯著提高，且其遠期生殖能力也有所改善。隨后研究［23］發現，大鼠BMSCs的卵巢局部移植對化療所致的卵巢早衰有明顯的治療作用，表現為大鼠卵巢各級卵泡數增加，E2濃度明顯上升，FSH濃度明顯下降，表明BMSCs能修復卵巢結構，改善卵巢內分泌功能。其機制可能與BMSCs能分泌VEGF、IGF-1、HGF等，抑制卵巢顆粒細胞凋亡有關。賀衛衛等［26］也證實，BMSCs可促進損傷卵巢功能修復，其機制可能是BMSCs通過腹腔血管進入血液循環到達受損傷卵巢，利用其多向分化潛能分化發育成受損傷的組織。BMSCs中可能還存在生殖干細胞，分化發育成各級卵泡及BMSCs可分泌多種細胞外基質，促進損傷卵巢功能的修復。另有研究［27－28］發現，BMSCs在體內能選擇性地遷移和停留在機體受損傷的組織，可能與MSCs表面表達的生長因子、細胞因子和細胞外基質受體有關，這些因子驅使移植的BMSCs遷移至炎癥部位。隨著BMSCs移植時間的推移，免疫損傷卵巢的各級卵母細胞逐漸增多，BMSCs移植4周后，卵巢各部分細胞形態均與正常卵巢相似;而且凋亡的顆粒細胞數明顯減少，表明BMSCs對卵巢免疫損傷的修復有效。2010年埃及國家研究中心在德國舉行的世界生殖和不孕大會報告上報道，BMSCs使生育能力有缺陷的雌性實驗鼠的卵巢功能得到康復。最近一項研究用卵泡刺激素受體(FSHreceptor，FSHR)基因敲除的雌性小鼠模型來研究人類POF［29］，靜脈注射BMSCs后發現，小鼠成熟卵泡數及總卵泡數明顯增加，與對照組相比，血清FSH下降，雌激素增加，并在移植骨髓干細胞的小鼠卵巢內檢測到FSHRmRNA，表明BMSCs可到達小鼠卵巢，并刺激卵巢分化和表達FSHR基因，使FSHR對FSH產生反應，恢復卵泡的成熟發育和類固醇激素的生成，這為臨床上有生育要求的POF患者恢復受孕提供了可能。李彩霞等［30］研究UCMSCs發現，其表達OCT4、Stella、Ifitm3等生殖系特異性標記物，且將其移植到POF小鼠體內后，具有向卵巢歸巢的能力，并能在局部存活生長，提示UCMSCs可能具有向生殖細胞轉化的潛能及卵巢損傷修復的作用。冷少華等［31］報道UCMSCs移植到動物體內后，能富集在卵巢早衰動物卵巢的卵泡周圍，非閉鎖始基卵泡數量顯著提高，表明UCMSCs具有向生殖細胞分化的能力。朱少芳等［32］通過鼠尾靜脈移植人UCMSCs到卵巢早衰的大鼠模型，發現體外標記PKH26的人UCMSCs可遷移至卵巢，主要沿基質血管分布，為追蹤人UCMSCs移植后在體內生長、分化和轉歸提供依據。李潔等［33］通過移植人羊水來源干細胞(AFS)治療大鼠卵巢早衰發現，AFS能有效地恢復動物的動情周期，提高體內雌激素分泌水平，改善卵巢組織卵巢早衰的狀況，并且分階段移植AFS比一次性移植AFS治療效果更顯著。綜上所述，MSCs移植修復損傷卵巢組織的機制可能為:(1)MSCs移植后，在特定的微環境誘導下可分化為受損組織的細胞，部分補償或替代其功能;(2)MSCs能分泌多種細胞因子，例如VEGF，HGF，IGF-I，TGF-β和GM-CSF等，通過旁分泌途徑參與顆粒細胞生長和凋亡調節過程。在體外和體內都能抑制靶細胞凋亡，修復受損組織細胞。(3)MSCs分化成卵巢組織細胞后，可能分泌激素，調控體內激素水平。(4)MSCs中可能還存在有生殖干細胞，分化發育成各級卵泡，促進損傷卵巢功能的修復，MSCs可分泌多種細胞外基質，也有助于損傷卵巢的恢復。

總結與展望

干細胞治療范文第5篇

干細胞分化的RPE細胞移植挽救感光細胞的確切機制尚不明，目前認為主要是兩種機制：神經營養因子的釋放，和色素上皮細胞與感光細胞之間生理作用的恢復。實驗中移植范圍之外的修復以及堿性成纖維細胞生長因子(basicfibroblastgrowthfactor，bFGF)能夠延遲感光細胞凋亡，這些研究表明：可擴散的細胞因子如睫狀神經營養因子、膠質細胞源性神經營養因子、腦源性神經營養因子，或bFGF可能參與細胞救援，延緩視網膜神經細胞損傷。同時，電鏡結果表明正常細胞間連接也是阻止感光細胞凋亡的一個重要因素。在RCS大鼠視網膜下腔內注射間充質干細胞，其呈六角形長入視網膜色素上皮層，與宿主RPE建立緊密連接，恢復感光細胞的功能，提示視網膜色素上皮和光感受器之間正常生理作用的恢復也是作用機制之一。

人胚胎干細胞(humanEmbryonicStemCells，hESC)分化為RPE細胞：胚胎干細胞(EmbryonicStemCells，ESC)取自哺乳動物囊胚期(人類胚胎發育過程中受精卵形成后第5天)的內細胞團。ESC在體外能直接誘導分化為視網膜神經細胞及RPE細胞，誘導分化的視網膜神經細胞移植后能整合進視網膜，并表達感光細胞標記物，誘導分化的RPE細胞移植到視網膜下可加強宿主感光細胞的存活[16]。若直接將ESC移植入眼內，可以在眼內形成視網膜神經節細胞樣細胞，但移植后有致瘤性，致畸胎瘤或是其他腫瘤的風險[16]。Vugler等[17]通過誘導hESC分化獲得了單層的視網膜色素上皮樣細胞。這些獲得的RPE細胞不僅在細胞形態和特異標志物的表達上符合成熟的成人RPE細胞的特征，同時在功能學上的也極其相似。而且，體內外實驗均證實其具有吞噬感光細胞外節的功能。多項動物實驗證實hESC分化的RPE細胞移植能夠在一定程度上挽救光感受器的功能并促進視覺功能的修復[17-19]。最近，美國FDA已批準hESC分化的RPE細胞移植用于Stargardt營養不良和年齡相關性黃斑病變兩類疾病的臨床實驗。但是，采用hESC來源分化RPE細胞，不可避免的存在免疫排斥問題和倫理學問題。

誘導的多潛能干細胞(inducedPluripotentStemCell，iPSC)分化為RPE細胞：iPSC是由外源導入轉錄因子，重編程體細胞，有自我更新、多向分化潛能及記憶能力等特點的一種細胞系[20]。Dennis等[21]培養的人iPSC和hESC都可以自發分化為RPE細胞，這兩種來源的RPE在形態和功能上十分相似，并且都類似胎兒期的RPE細胞。另外，iPSC可以避免移植過程中的免疫排斥問題和胚胎干細胞帶來的倫理問題。Carr等[22]對RCS大鼠進行的體內外實驗證實iPSC分化的RPE細胞移植通過吞噬作用維持感光細胞的功能，視網膜外核層厚度和視功能明顯增加，且改善范圍同樣超出了細胞移植的范圍，提示移植細胞激發宿主的神經保護作用。然而，與人ESC相比，人iPSC-RPE細胞移植于RCS大鼠后的排斥反應明顯。盡管hESC和iPSC分化的RPE細胞在動物模型上被證明是有明確功能的，但同時恢復并保持RPE細胞的極性和Bruch膜結構對于促進其移植后長期存活和功能整合是非常必要的。要使供體RPE細胞移植后長期存活，不發生凋亡，必須緊緊貼附于健康的Bruch膜[23]。目前認為的RPE移植的臨床適應癥中，Bruch膜往往已經老化或破壞了，因而降低了移植成功率。RPE細胞移植長期存活主要決定于移植的這些細胞能否逃避受體免疫排斥反應。移植免疫排斥反應本身還存在成瘤，感染和肝腎毒性等并發癥。自體iPSC來源的細胞移植可以避免這一問題，而使用iPSC存在的一個主要問題是原有的遺傳缺陷再次導入而使供體細胞也發生原始病變。

干細胞分化為感光細胞

目前對于感光細胞完全喪失的視網膜疾病缺乏有效的治療方法，例如視網膜色素變性晚期等。如果沒有感光細胞，所謂的RPE移植以及基因治療都將失去意義，因此，必須尋找途徑重建感光細胞層。感光胞是感覺神經元，只在一個方向上與雙極細胞或水平細胞形成連接，感光細胞替換通常比其它神經元都更直接更容易。另外，感光細胞對外源性光刺激產生反應，并不需要復雜的樹枝狀突觸來產生傳入沖動。這些均有利視網膜感光細胞移植[24]。人們嘗試用各種干細胞來獲取感光細胞。Tao等[25]在體外對人的間充質干細胞(MesenchymalStemCell，MSC)進行培養，并分化成感光細胞。Sakaguchi等[26]將神經干細胞(NeuralStemcells，NSC)移植入成體視網膜，部分移植細胞整合入宿主視網膜，但這些細胞并沒有能夠分化成為典型的視網膜細胞。其失敗的原因可能是NSC分化為視網膜感光細胞的過程中需要多種復雜的分子事件來引導，而成體視網膜不能夠提供誘導環境。2006年，Maclaren等[27]將感光細胞前體(Photoreceptorprecursors)移植到視網膜變性小鼠的視網膜下腔，發現移植的細胞能夠對光刺激產生反應，證實供體細胞能夠整合到成熟的視網膜神經通路，還證實了移植細胞的整合率與細胞所處的發育階段密切相關。他們認為，最適宜于外層視網膜修復的供體細胞是有絲分裂后期的感光細胞。

在一定條件下，ESC可以被誘導成為光感受器前體細胞。體外研究表明hESC也可分化為表達感光細胞感光細胞標記物的細胞，成為提供感光細胞的來源[28]。將hESs體外分化后移植到Crx小鼠(Lebers先天性黑曚動物模型)，移植細胞能夠移行并整合到病變視網膜中并且改善小鼠的對光反應，這些細胞能表達感光細胞的特異標記物并且分化出了感光細胞外節樣的形態結構[29]。近年來，iPSC的研究成為醫學研究領域新的熱點，研究證實iPSC可誘導分化為感光細胞。Lamba等[30]從人成纖維細胞誘導產生iPSC，經體外培養，分離出感光細胞，將其移植到正常成年小鼠視網膜下腔，發現供體細胞能夠整合到受體并表達視網膜感光細胞標記物。iPSC在不同的微環境和時間段，可以分化為不同的細胞。因此，可以選擇性地誘導其成為特異細胞用于移植。

干細胞分化為視網膜神經節細胞(Retinalganglioncells，RGC)

RGC是視網膜及視神經軸突的投射神經元，視網膜與大腦聯系的視覺通路。干細胞分化為RGC的機制極其復雜，相應的研究進展較其他細胞少。它需要供體細胞移行整合入神經節細胞層分化為RGC樣細胞，而且還需要軸突長入視神經內并穿過髓鞘到大腦的靶區[31]。正常RGC不僅與視網膜神經細胞形成突觸聯系，還要發出軸突與視覺通路上的很多神經元形成突觸聯系，因此相較于RPE或是感光細胞移植，RGC的替代治療更是個挑戰。ESC[32]和MSC[33]都曾被作為細胞來源用于RGC的替代治療，研究中發現供體細胞能夠移行并整合到受體視網膜，但最終都沒有觀察到任何功能學方面的改善。大鼠骨髓MSC經堿性成纖維細胞生長因子體外誘導可分化為具有RGC表型的神經元樣細胞，誘導后細胞間存在突觸聯系[34]。小鼠成纖維細胞來源的iPSC，分化為視網膜神經節樣細胞，這些細胞能夠存活但無法整合到健康的視網膜中[35]。最常累及視網膜神經節細胞的病變是青光眼，這是一種神經退行性疾病，其以進行性神經節細胞喪失為特征。有文獻報道在青光眼的大鼠玻璃體腔內注射骨髓MSC能夠促進RGC的存活[33]，同樣在青光眼大鼠模型體內腔注射少突膠質細胞前體細胞，顯著增加了RGC的存活率，對RGC有明顯的保護作用[36]，有望成為青光眼治療的一種新的方法。#p#分頁標題#e#

展望