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【摘要】目的觀察金花茶種子不同提取物對激素相關(guān)性腫瘤體外抑制作用。方法采用噻唑藍比色法(MTT)檢測金花茶種子不同提取物對人宮頸癌HeLaS3細胞和人前列腺癌PC3細胞增殖的影響。結(jié)果金花茶種子乙醇提取物、正丁醇部分和水溶部分都顯示了較強的抑制人宮頸癌HeLaS3細胞和人前列腺癌PC3細胞增殖的作用，其IC50分別為85.88，67.62，55.71μg/ml和63.06,56.20,68.53μg/ml，且抑制作用和樣品濃度呈量效關(guān)系。結(jié)論金花茶種子乙醇提取物的正丁醇部分和水溶部分在體外對激素相關(guān)性腫瘤具有抑制作用，為其抗癌活性的有效部位。

【關(guān)鍵詞】金花茶;宮頸癌;前列腺癌;HeLaS3細胞;PC3細胞

金花茶Camelliachrysantha(Hu)Tuyama系山茶科Theaceae山茶屬CamelliaLinn.金花茶組SectionchrysanthaChang植物，被列為國家一級、世界二級珍稀保護植物［1］。金花茶不僅有較高的觀賞價值，而且具有一定的藥用價值和營養(yǎng)價值。其葉和花為壯族民間用藥，主要用于治療咽喉炎、痢疾、高血壓病、便血、月經(jīng)不調(diào)［2,3］。金花茶葉是一種含有豐富營養(yǎng)成分的山茶，含有多種微量元素和氨基酸，而咖啡堿含量低［4］。我們在對山茶屬植物抗腫瘤活性的研究中發(fā)現(xiàn)，金花茶種子的乙醇提取物具有較強的抗腫瘤作用。本研究將通過考察金花茶種子乙醇提取物不同萃取部位對人宮頸癌HeLaS3細胞和人前列腺癌PC3細胞增殖的影響，探討其抗癌活性的有效部位及量效關(guān)系。

1材料與方法

1.1金花茶的提取分離金花茶種子采集于廣西南寧，由廣西林業(yè)科學研究院高級工程師梁盛業(yè)鑒定。取金花茶種子100g，粉碎后用95%乙醇回流提取3次，3h/次，合并提取液，減壓濃縮成浸膏，加適量水分散，依次用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取，各萃取液分別濃縮至浸膏，得醋酸乙酯部分、正丁醇部分和水溶部分，減壓濃縮并真空干燥后得到各部分的浸膏，各浸膏用DMSO配成各濃度溶液備用。

1.2細胞系和培養(yǎng)液人宮頸癌HeLaS3細胞株和人前列腺癌PC3細胞株從HumanSciencesResearchResourceBank(日本人類科學基金會,東京,日本)獲得，HeLaS3細胞培養(yǎng)于含有10%熱滅活小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液中，PC3細胞培養(yǎng)于含有10%熱滅活小牛血清的DMEM培養(yǎng)液中，37℃，5%CO2，飽和濕度條件下培養(yǎng)。選取對數(shù)生長期細胞進行實驗。

1.3體外細胞增殖抑制實驗噻唑藍比色法(MTT)檢測細胞生長情況，將HeLaS3細胞和PC3細胞分別種于96孔培養(yǎng)板，每個孔細胞數(shù)為5×103，分別培養(yǎng)于RPMI1640培養(yǎng)液和DMEM培養(yǎng)液中，在37℃，5%CO2條件下培養(yǎng)24h。培養(yǎng)24h后，以PBS沖洗細胞，然后分別加入新的培養(yǎng)液和系列濃度的待測樣品。經(jīng)初步篩選后確定實驗組設(shè)6個藥物濃度組，每組藥物的終濃度分別為5，10，20，40，80，160μg/ml，對照組加入同樣濃度的二甲基亞砜（DMSO），培養(yǎng)24h。培養(yǎng)結(jié)束前4h每孔加入20mlMTT溶液（5g/ml），離心，棄上清液，加入200mlDMSO充分溶解結(jié)晶物，酶標儀測490nm處吸光度值。因為吸光度值與培養(yǎng)液中活細胞數(shù)成正比，所以通過吸光度值可以計算細胞存活百分率。

1.4統(tǒng)計分析以對照組中細胞存活率為100%，樣品組與其相比所得相對值為細胞存活百分率，實驗結(jié)果以±s表示，采用統(tǒng)計學t檢驗進行組間比較分析，P<0.05為差異有顯著性。

2結(jié)果

用濃度分別為5，10，20，40，80，160μg/ml的金花茶種子的不同提取物處理HeLaS3細胞和PC3細胞，觀察不同濃度的樣品對HeLaS3細胞和PC3細胞增殖的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)金花茶種子乙醇提取物、正丁醇部分和水溶部分都顯示了較強的抑制HeLaS3細胞和PC3細胞增殖的作用（見表1），其IC50分別為85.88，67.62，55.71μg/ml和63.06，56.20，68.53μg/ml。其中，正丁醇部分和水溶部分的高濃度組（160μg/ml）對HeLaS3細胞和PC3細胞增殖的抑制率均達60%以上，且抑制率隨樣品濃度的加大而增加（各濃度組與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義，P<0.01），呈現(xiàn)出劑量效應(yīng)關(guān)系。表1金花茶各提取物對HeLaS3細胞和PC3細胞增殖的影響（略）

3討論

我們采用重組人雌（孕）激素受體基因酵母法對金花茶種子乙醇提取物進行了雌（孕）激素活性試驗，證明它們都具有明顯的雌（孕）激素活性，同時又有較強的抗雌（孕）激素活性，對雌（孕）激素受體具有雙向調(diào)節(jié)作用，是一種非常理想的選擇性雌（孕）激素調(diào)節(jié)劑［5,6］，引發(fā)我們對其抗激素相關(guān)性腫瘤（GonadalHormonesDependentTumour,GHDT）的研究。因為具有雌激素樣作用的藥物能直接作用于雌激素受體，通過影響激素平衡來抑制某些激素相關(guān)性腫瘤。

我們首先考察了金花茶不同植物部位抑制HeLaS3細胞和PC3細胞增殖的活性，在金花茶種子乙醇提取物、花蕾乙醇提取物、葉乙醇提物和葉水提取物中，金花茶種子乙醇提取物顯示了較強的抑制HeLaS3細胞和PC3細胞增殖的活性，為了確定其抗癌活性的有效部位，我們考察了金花茶種子乙醇提取物不同萃取部位對HeLaS3細胞和PC3細胞增殖的影響，結(jié)果表明金花茶種子乙醇提取物的正丁醇部分和水溶部分具有較強的抑制HeLaS3細胞和PC3細胞增殖的活性，初步確定為抗癌活性的有效部位。對有效部位化學成分的定量分析結(jié)果表明，正丁醇部分含總皂苷19.08%，總多酚6.92%，總黃酮5.36%，水溶部分含總皂苷17.36%，總多酚5.15%，總黃酮1.66%，其中哪些成分是抗癌活性的物質(zhì)基礎(chǔ)及其作用機理還有待進一步研究。超級秘書網(wǎng)：

【參考文獻】

［1］梁盛業(yè),陸敏珠.中國金花茶栽培與開發(fā)利用［M］.北京:中國林業(yè)出版社,2005:1.

［2］黃燮才.金花茶開發(fā)利用概況及前景預(yù)測［J］.中國中醫(yī)藥信息雜志,1994,1(6):10.

［3］王永奇,吳小娟,李紅冰,等.藥用山茶屬植物的研究［J］.大連大學學報,2006,27(4):47.

［4］韋霄,蔣水元,蔣運生,等.珍稀瀕危植物金花茶研究進展［J］.福建林業(yè)科技,2006,33(3):169.

［5］吳小娟,李劍,劉蕓,等.重組雌激素受體基金酵母法對山茶子抗骨質(zhì)疏松活性部位的研究［J］.遼寧中醫(yī)藥雜志,2008,35(7):126.

［6］吳小娟,李劍,劉蕓,等.重組雌激素受體基金酵母法對山茶子拮抗孕激素作用的研究［J］.時珍國醫(yī)國藥,2008,19(8):1817.