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叉尾鮰養殖論文:AOZ在叉尾鮰中的分布與除去規律

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叉尾鮰養殖論文:AOZ在叉尾鮰中的分布與除去規律

本文作者:劉永濤1,2艾曉輝1,2索紋紋1,3余少梅1,3楊秋紅1,2作者單位:1中國水產科學研究院淡水研究中心2中國水產科學研究院長江水產研究所3華中農業大學水產學院

標準曲線方程與相關系數

在1~20.0ng/mL和50.0~1000.0ng/mL范圍內aoz線性關系良好,低濃度線性方程為Y=0.0843381+0.355336x;高濃度線性方程為Y=1.08424+4.42862x,相關指數r2均大于0.9994。

方法檢測限、回收率與精密度

本試驗條件下,血液、肌肉、肝臟、腎臟和皮膚組織中AOZ方法檢測限均為0.5μg/kg。各組織中5個質量濃度加標水平的AOZ平均回收率為89.42%~109.53%,測得的日內精密度與日間精密度均小于10%,分析方法滿足分析要求。

AOZ在斑點叉尾血液中的濃度

將測到的AOZ的峰面積分別與其氘代同位素內標峰面的比值代入標準曲線方程,可以求出AOZ在斑點叉尾血液中的濃度值(見表3)。由表3可以看出,AOZ峰濃度出現在4h,濃度為(2649.0±463.1)ng/mL,1440h(60d)時濃度為(6.66±4.47)ng/mL,2160h(90d)后才檢測不到AOZ。由于AOZ與血液中蛋白質結合緊密,只有在強酸性條件下才能被水解下來,而魚體血液一般成弱堿性,因此,AOZ不易被消除。

AOZ在斑點叉尾組織中分布和消除規律

AOZ在斑點叉尾肌肉中4h達到峰濃度(1169.37±194.45)μg/kg,1440h(60d)時濃度為(4.50±1.55)μg/kg,2160h(90d)時肌肉中未檢出AOZ。AOZ在斑點叉尾皮膚中4h達到峰濃度(2308.49±100.45)μg/kg,1440h(60d)時濃度為(33.65±15.53)μg/kg,2160h(90d)時皮膚中未檢出AOZ。AOZ在斑點叉尾肝臟中4h達到峰濃度(7816.2±568.5)μg/kg,1440h(60d)時濃度為(17.1±9.8)μg/kg,2160h(90d)時肝臟中未檢出AOZ。斑點叉尾腎臟中AOZ在4h達到峰濃度為15938.13μg/kg,1440h(60d)時濃度為21.30μg/kg,2160h(90d)時腎臟中未檢出AOZ(表4)。上述結果表明AOZ在斑點叉尾各組織中不易消除,各組織中AOZ至少需要2754℃•d才能消除。數據經回歸處理得到組織中藥物濃度(C)與時間(t)關系的消除曲線方程、相關指數(r2)及消除半衰期(T1/2),(見表5)。AOZ在4種組織中的消除半衰期T1/2皮膚>肌肉>血液>肝臟>腎臟。圖1-圖6中每個圖的4個離子色譜峰分別為AOZ的母離子m/z236,2個子離子m/z104、m/z134的色譜峰和AOZ-D4的子離子m/z134的色譜峰。根據歐盟96/23/EC[16]指令附錄Ⅰ的A組物質(包括AOZ)的確認需要最少4個識別點,而LC-MS-MS1個母離子+2個子離子的識別點數為4,因此,采用該方法可以對AOZ進行定性定量分析。

呋喃唑酮原藥在動物體內被迅速代謝,被代謝的主要產物為AOZ,而AOZ在動物體內卻很難消除。歐盟、美國、日本和我國等國家和組織均通過檢測呋喃唑酮的主要代謝物AOZ來監測呋喃唑酮的使用情況,并規定硝基呋喃類藥物的代謝物作為殘留檢測的標示物其最高殘留限量(MRL)為1μg/kg[17]。徐維海等[13]報道,給羅非魚投喂劑量為30mg/(kg•d)的呋喃唑酮藥餌7d,實驗水溫為(27±2)℃,羅非魚肌肉中AOZ最高濃度為(31.19±9.68)μg/kg,建議羅非魚的休藥期至少為22d;譚志軍等[5]報道,在水溫保持在(17±1)℃,投喂(400.0±50.0)g大菱鲆15mg/kg藥餌,每天投喂2次,投喂5d,其肌肉中的AOZ最高濃度為(1201.93±36.24)μg/kg,185d時仍有(29.68±4.11)μg/kg;而本試驗AOZ在斑點叉尾肌肉中的最高濃度為(1169.4±194.5)μg/kg,60d時AOZ仍有(4.50±1.55)μg/kg,90d時才未檢測到,從上述試驗結果可以看出水產動物品種、規格不同,試驗水溫等條件都會造成AOZ在魚體中殘留濃度和時間存在較大差異,但總體來看AOZ在水產動物體內殘留時間較長,這與AOZ與動物體內蛋白質結合緊密不易被代謝和排泄的存在狀態有關。

本試驗在設計水產動物藥物代謝及殘留試驗時盡量按照生產實際的用藥方式和養殖方式進行,以期獲得與實際生產情況接近的數據。在本試驗條件下血液、肌肉、皮膚、肝臟、腎臟中AOZ均在停藥后4h時達到最高濃度,1440h(60d)時血液和各組織中AOZ均有檢出濃度,分別是其判定限1μg/kg的6.66、4.5、33.7、17.1和21.3倍。血液和各組織中AOZ在2160h(90d)時才未被檢測到。按組織中AOZ濃度水平由高到低排列的順序為腎臟>肝臟>皮膚>血液>肌肉,同一時間點腎臟組織較其它組織濃度高,這可能與腎臟組織作為AOZ的排泄組織,并蓄積了較高濃度的AOZ有關。消除半衰期從試驗結果來看皮膚的消除半衰期最長,其次為肌肉組織,這2種組織的消除半衰期均長于肝臟和腎臟。主要原因可能是AOZ通常在體內以共價鍵形式與蛋白質結合緊密形成較穩定的殘留,肝臟中肝微粒體可以將部分AOZ降解成乙醇肼[18],而腎臟可以排泄部分AOZ,因此,其消除半衰期較皮膚和肌肉短。皮膚作為可食組織的一部分AOZ的濃度高于肌肉組織,而目前我國對于水產品中AOZ的監控主要是魚體的肌肉組織,因此,建議相關部門將水產動物的可食組織皮膚和肌肉一起列為檢測靶組織。

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